Las hijas del emperador Carlos

• En 1525, el 11 de marzo,  Isabel de Portugal casa con su primo hermano Carlos I. Ella tiene  23 años y él 26. La boda se celebró en los Reales Alcázares de Sevilla, en el actual Salón de Embajadores.

De este matrimonio nacen, 

Felipe (21 de mayo de 1527 – 13 de septiembre de 1598), sucesor de su padre en el trono de España (juntamente con sus posesiones en América, los Países Bajos, Milán, Cerdeña, Nápoles y Sicilia) con el nombre de Felipe II. Casa en su cuarto matrimonio en 1570 con su sobrina Ana de Habsburgo, hija de su hermana María.

María (21 de junio de 1528 – 26 de febrero de 1603), quién en 1548 se casó con el emperador Maximiliano II de Habsburgo, su primo hermano, hijo de Fernando de Habsburgo, hermano del rey y emperador Carlos. Padres de 15 hijos. Entre ellos de Ana de Habsburgo (Cigales, Valladolid, 1 de noviembre de 1549 - Badajoz, 26 de octubre de 1580). Casada con su tío,  Felipe II, rey de España, y madre de Felipe III.

La acusada consanguinidad entre Felipe II y su cuarta esposa  los cónyuges provocó que el Papa Pío V mostrara sus reservas respecto a este enlace pero finalmente otorgó la necesaria dispensa. Las capitulaciones del matrimonio entre Felipe II y su sobrina la archiduquesa Ana de Austria se firmaron en Madrid el 24 de enero de 1570. La boda, celebrada por poderes, tuvo lugar en el Castillo de Praga el 4 de mayo de aquel año y la nueva Reina desembarcó en España, en el puerto de Santander, el 3 de octubre.

Pocos meses después del parto de su hija pequeña, la reina Ana de Austria falleció en Talavera la Real (Badajoz), víctima de una gripe epidémica, enfermedad que previamente había padecido el rey Felipe II. Murió nuevamente embarazada y fue enterrada en el Real Monasterio de Santa Ana de Badajoz, donde estuvo durante varios años hasta su traslado al Real Monasterio de San Lorenzo de El Escorial. Como recuerdo, se permitió que las entrañas de la reina se quedaran enterradas en el monasterio pacense de Santa Ana, donde actualmente permanecen enterradas en el suelo del coro de dicho monasterio

Fernando (22 de noviembre 1529 – muere a los pocos meses).

29 de junio de 1534 (primer aborto varón de la emperatriz).

Juana (24 de junio de 1535 – 7 de septiembre de 1573), quién en 1552 en Toro se casó con su primo hermano Juan Manuel de Portugal, infante heredero de Portugal, hijo de Juan III de Portugal y de su prima hermana Catalina de Aragón, hermana pequeña del rey y emperador Carlos. Juana  da a luz dieciocho días después de la muerte de su marido a su hijo Sebastián (1554-1578), sucesor de su abuelo en el trono con el nombre de Sebastían I.

Juan (19 de octubre de 1537, muere a los pocos días).

1 de mayo de 1539 (segundo aborto varón y muerte de la emperatriz)